Đêm Tối Và Bình Minh lấy bối cảnh năm 1943, khi một vụ nổ khủng khiếp đã làm chấn động thành phố Thượng Hải, dẫn đến cuộc đối đầu lần đầu giữa Lộ Chính Dương (Nhiếp Viễn) - một thành viên của Đảng Cộng sản Trung Quốc, và cựu cảnh sát Lâm Thiếu Bạch (Trần Triết Viễn). Sáu năm sau, khi Thượng Hải được giải phóng, Lộ Chính Dương nắm giữ vị trí cao trong phòng chống tình báo của Cảnh sát Thượng Hải. Đối diện với khủng hoảng điều tra tình báo, anh quyết định mời Lâm Thiếu Bạch - người có biệt danh thánh thông tin Thượng Hải - tham gia. Cả hai phối hợp điều tra và khám phá nhiều vụ án lớn như cướp kho bạc và làm giả tiền, góp phần triệt phá âm mưu của những đặc vụ giấu mặt. Qua quá trình làm việc, họ dần xây dựng niềm tin và trở thành đồng đội đáng tin cậy.